5-Aminofluorescein

5-Aminofluorescein (còn gọi là 5-AF hoặc Fluoresceinamine) được sử dụng rộng rãi làm thuốc thử đánh dấu huỳnh quang. Amin chính của 5-Aminofluorescein có thể phản ứng với các nhóm carboxyl (thông qua kích hoạt EDC/NHS), aldehyd, xeton hoặc este hoạt hóa (ví dụ: este NHS) để tạo thành liên kết amit hoặc imine ổn định. Nó thể hiện mức kích thích tối đa ở ~ 490 nm (λmax = 496 nm trong dung dịch đệm borat pH 8,5) và mức phát xạ tối đa ở ~ 515 nm, mang lại tín hiệu màu xanh lục sáng với khả năng quang hóa tốt và độ dịch chuyển Stokes khoảng 40 nm. Cường độ huỳnh quang của nó phụ thuộc vào độ pH, tăng đáng kể trong điều kiện kiềm (pH 8‑9), được cho là do sự thay đổi trạng thái proton hóa của nhóm amino.

5-Aminofluorescein đã được sử dụng rộng rãi trong nghiên cứu sinh học và y học – từ dán nhãn protein và kháng thể đến xây dựng hệ thống phân phối thuốc mục tiêu và cảm biến huỳnh quang. 5-Aminofluorescein cũng là chất trung gian quan trọng trong quá trình tổng hợp fluorescein isothiocyanate (FITC Isomer I), một trong những thuốc thử phổ biến nhất để dán nhãn protein.

Thông số sản phẩm

Lưu ý chuẩn bị và bảo quản

5‑AF thường được tổng hợp bắt đầu từ axit 4‑nitrophthalic, sau đó là quá trình khử (ví dụ: với hydrazine/FeOOH) và ngưng tụ bằng resorcinol trong axit metansulfonic. Sản phẩm thô là hỗn hợp của các đồng phân 5 và 6, được tách ra bằng cách kết tinh. Các phương pháp hiện đại (hỗ trợ vi sóng hoặc enzym) có thể cải thiện năng suất và giảm sản phẩm phụ. Quá trình tinh chế cuối cùng bằng HPLC đảm bảo độ tinh khiết ≥95%, với cấu trúc được xác nhận bởi NMR và MS.

Bảo quản - Hợp chất nhạy cảm với ánh sáng, không khí và độ ẩm. Bảo quản trong thùng chứa kín đã được lọc argon ở nhiệt độ 4°C, ở nơi tối. Để bảo quản lâu dài (>6 tháng), nên sử dụng ở nhiệt độ -20°C ở dạng bột (ổn định ít nhất 3 năm). Dung dịch trong DMSO có thể bảo quản ở -80°C trong 6 tháng hoặc ở -20°C trong 1 tháng. Tránh lặp đi lặp lại các chu kỳ đóng băng-tan băng. Vận chuyển ở nhiệt độ môi trường có thể chấp nhận được nếu được bảo vệ khỏi ánh sáng và độ ẩm.

Câu hỏi thường gặp (FAQ)

Câu hỏi 1: Sự khác biệt giữa 5‑Aminofluorescein (5‑AF) và FITC là gì? Tôi phải chọn như thế nào?

Đáp: Cả hai đều là thuốc nhuộm huỳnh quang màu xanh lá cây, nhưng nhóm phản ứng của chúng khác nhau.

● 5‑AF có amin bậc một (–NH₂). Nó yêu cầu kích hoạt nhóm carboxyl của mục tiêu (sử dụng EDC/NHS) trước khi liên hợp. Tốt nhất để dán nhãn các phân tử đã chứa nhóm carboxyl.

● FITC có nhóm isothiocyanate (–N=C=S) phản ứng trực tiếp với các amin trên mục tiêu (ví dụ: dư lượng lysine trong protein) – không cần kích hoạt trước. FITC thuận tiện hơn cho việc ghi nhãn protein thông thường.

● Chọn 5‑AF nếu bạn cần liên hợp định hướng, cụ thể (ví dụ: thông qua bộ điều khiển cacboxyl) hoặc nếu bạn dự định tổng hợp các dẫn xuất huỳnh quang tùy chỉnh. FITC thường đơn giản hơn để ghi nhãn kháng thể trực tiếp.

Câu hỏi 2: Điều kiện phản ứng điển hình để dán nhãn các phân tử sinh học bằng 5-AF là gì?

Đáp: Phương pháp phổ biến nhất là ghép nối amide: kích hoạt các nhóm carboxyl trên phân tử mục tiêu bằng EDC và NHS (trong đệm MES hoặc PBS, pH 5,5–6,5), sau đó thêm 5‑AF và điều chỉnh về pH 7,5–8,5. Ủ ở nhiệt độ phòng hoặc 37°C trong 2–4 giờ. Đối với các mục tiêu chứa aldehyd (ví dụ: glycoprotein), hãy sử dụng quá trình amin hóa khử bằng natri cyanoborohydrua. Thuốc nhuộm không phản ứng có thể được loại bỏ bằng cách khử muối hoặc lọc máu. Tỷ lệ mol thuốc nhuộm trên protein từ 5:1 đến 20:1 là điểm khởi đầu tốt.

Tại sao Cosperpharm? – Lợi thế cạnh tranh của chúng tôi

Liên hệ với chúng tôi

Cho dù bạn cần một mẫu nhỏ để thử nghiệm thí điểm hay số lượng lớn để sản xuất thương mại, Cosperpharm sẵn sàng hỗ trợ bạn. Hãy liên hệ với chúng tôi ngay hôm nay để thảo luận về các yêu cầu của bạn đối với 5-Aminofluorescein - và hãy xem chúng tôi có thể giúp thúc đẩy dự án của bạn như thế nào.