Photphoramit 2'-O-Metyl-rA(N-Bz)

2′-O-Methyl-rA(N-Bz) Phosphoramidite là một monome photphoramidite biến tính có thể được sử dụng để tổng hợp oligonucleotide. Sự biến đổi 2′-O-methyl mang lại khả năng kháng nuclease đáng kể đối với oligonucleotide trong khi vẫn bảo toàn các đặc tính liên kết hydro của các chuỗi song công RNA/RNA một cách trung thực hơn so với các giống lai DNA/RNA. Trong các ứng dụng can thiệp RNA (RNAi), Phosphoramidite 2′-O-Methyl-rA(N-Bz) thường được kết hợp vào các chuỗi cảm giác và antisense của các chuỗi song công RNA can thiệp nhỏ (siRNA) để tăng cường độ ổn định của huyết thanh và giảm tác dụng ngoài mục tiêu mà không ảnh hưởng đến hoạt động của RNAi. Phosphoramidite 2′-O-Methyl-rA(N-Bz) cũng đóng vai trò là khối xây dựng quan trọng trong quá trình tổng hợp hóa học các oligonucleotide RNA có chứa các biến đổi 2′-O-methyladenosine đặc hiệu tại chỗ; các nhóm bảo vệ (DMT ở 5′, Bz ở N6, CE photphoramidite ở 3′) cho phép lắp ráp từng bước các chuỗi RNA với độ chính xác cao và kiểm soát trên các bộ tổng hợp DNA/RNA tự động. Ngoài phương pháp điều trị RNA, Phosphoramidite 2′-O-Methyl-rA(N-Bz) còn được ứng dụng trong quá trình tổng hợp các mô hình RNA phân nhánh phốt phát để nghiên cứu các cấu trúc RNA bất thường và chuẩn bị các đầu dò oligonucleotide huỳnh quang ổn định nhiệt.

Thông số sản phẩm

Tại sao Cosperpharm? – Lợi thế cạnh tranh của chúng tôi

Ưu điểm sản phẩm

1. Biến đổi 2′-O-Methyl để kháng nuclease và ổn định nhiệt

Sự biến đổi 2′-O-methyl ở vị trí 2′ ribose là một trong những biến đổi hóa học được xác nhận rộng rãi nhất trong phương pháp trị liệu bằng oligonucleotide. Các oligonucleotide kết hợp với 2′-O-Methyl-rA(N-Bz) Phosphoramidite thể hiện khả năng kháng endo- và exonuclease được tăng cường rõ rệt so với RNA không biến đổi, với độ ổn định nhiệt được cải thiện của các song công RNA/RNA (tăng Tm) mà không ảnh hưởng đến tính đặc hiệu của cặp bazơ Watson-Crick. Việc sửa đổi này đã được triển khai thành công trong các loại thuốc oligonucleotide được FDA phê chuẩn và nhiều ứng cử viên ở giai đoạn lâm sàng.

2. Bảo vệ N6-Benzoyl để tổng hợp có độ trung thực cao

Nhóm bảo vệ benzoyl (Bz) trên amin ngoại vòng N6 của bazơ adenine ngăn chặn các phản ứng phụ không mong muốn trong chu kỳ ghép nối photphoramidite, chẳng hạn như các sự kiện phân nhánh hoặc kết thúc chuỗi do quá trình khử purin hoặc acyl hóa. Nhóm Bz được loại bỏ hoàn toàn trong các điều kiện khử bảo vệ oligonucleotide tiêu chuẩn (amoniac đậm đặc, 55°C, 8–16 giờ hoặc AMA), thu được bazơ adenine tự nhiên mà không phát hiện được sản phẩm phụ.

3. Tổ chức trước cấu tạo đường C3′-Endo

Sự thay thế 2′-O-methyl khóa đường ribose thành cấu trúc C3′-endo (Bắc) - cấu trúc tương tự được RNA chấp nhận trong các chuỗi song công dạng A. Sự sắp xếp trước về hình dạng này làm giảm mức phạt entropic khi lai với các mục tiêu RNA bổ sung, dẫn đến ái lực liên kết cao hơn (Tm cao hơn) đối với các oligonucleotide biến đổi 2′-O-methyl so với DNA hoặc RNA không biến đổi của cùng một trình tự.

4. Khả năng tương thích nhóm bảo vệ tiêu chuẩn để tổng hợp tự động

Phosphoramidite 2′-O-Methyl-rA(N-Bz) mang cùng các nhóm bảo vệ 5′-O-DMT và N6-Bz được sử dụng trong các photphoramidite RNA tiêu chuẩn, cùng với photphoramidite β-cyanoethyl (CE) ở vị trí 3′. Thiết kế này đảm bảo tích hợp liền mạch vào quy trình tổng hợp DNA/RNA tự động hiện có mà không yêu cầu các giao thức hủy bảo vệ chuyên dụng hoặc điều kiện ghép nối được sửa đổi.

5. Tiện ích trị liệu rộng rãi trên các nền tảng oligonucleotide

Phosphoramidite 2′-O-Methyl-rA(N-Bz) được sử dụng trên nhiều nền tảng trị liệu oligonucleotide: siRNA (sửa đổi chuỗi cảm giác và antisense), oligonucleotide antisense (ASO) để làm im lặng gen, aptamer cho các ứng dụng chẩn đoán và phân phối mục tiêu, và các đầu dò RNA sửa đổi để chẩn đoán phân tử. Biến đổi 2′-O-methyl cũng được sử dụng rộng rãi trong các RNA dẫn hướng CRISPR‑Cas để nâng cao tính ổn định và hiệu quả chỉnh sửa.

Kịch bản ứng dụng

1. Phát triển liệu pháp siRNA

Phosphoramidite 2′-O-Methyl-rA(N-Bz) được sử dụng để đưa các biến đổi 2′-O-methyladenosine vào các chuỗi cảm giác và/hoặc đối nghĩa của các chuỗi song công RNA can thiệp nhỏ (siRNA) để tăng cường độ ổn định của huyết thanh, giảm tác dụng ngoài mục tiêu qua trung gian của bộ máy RNAi (ví dụ: tải chuỗi hành khách) và giảm kích thích miễn dịch (kích hoạt TLR7/8). Việc sửa đổi 2′-O-methyl là thành phần tiêu chuẩn của nhiều nền tảng siRNA tiên tiến về mặt lâm sàng.

2. Sản xuất Antisense Oligonucleotide (ASO)

Phosphoramidite 2′-O-Methyl-rA(N-Bz) được tích hợp rộng rãi vào các oligonucleotide antisense cho các ứng dụng làm im lặng gen. Sự biến đổi 2′-O-methyl làm tăng tính kháng nuclease đối với ASO trong chất lỏng sinh học và tăng cường ái lực liên kết với các mục tiêu RNA bổ sung mà không làm gián đoạn cơ chế phân cắt qua trung gian RNase H (khi được đặt trong thiết kế khe hở 2′-O-methyl/2′-deoxy).

3. Tổng hợp hóa học RNA Oligonucleotide

Phosphoramidite 2′-O-Methyl-rA(N-Bz) đóng vai trò như một khối xây dựng cho quá trình tổng hợp hóa học pha rắn của các oligonucleotide RNA chứa dư lượng 2′-O-methyladenosine đặc hiệu tại vị trí. Các nhóm bảo vệ (5′-O‑DMT, N6‑Bz, CE photphoramidite) tương thích với các chu trình tổng hợp RNA tiêu chuẩn và các điều kiện khử bảo vệ (NH₃, 55°C, 8–16 h hoặc AMA), cho phép tích hợp liền mạch vào quy trình tổng hợp đã thiết lập.

4. Thiết kế đầu dò Oligonucleotide huỳnh quang

Các biến đổi 2′-O-methyl cải thiện độ ổn định nhiệt của đầu dò huỳnh quang (ví dụ: đèn hiệu phân tử, đầu dò TaqMan) được sử dụng trong PCR thời gian thực và lai tại chỗ. Phosphoramidite 2′-O-Methyl-rA(N-Bz) cho phép đưa các biến đổi ổn định vào trình tự thăm dò, tăng tỷ lệ tín hiệu trên nhiễu và cho phép phát hiện mạnh mẽ hơn các mục tiêu RNA có độ phong phú thấp.

5. Phát triển Aptamer Các aptamer biến đổi hóa học kết hợp

Các nucleotide 2′-O-methyl thể hiện tính kháng nuclease được cải thiện, thời gian bán hủy in vivo kéo dài và ái lực liên kết mục tiêu được tăng cường so với các aptamer RNA không biến đổi. Phosphoramidite 2′-O-Methyl-rA(N-Bz) là khối xây dựng quan trọng để tạo ra các thư viện aptamer biến đổi 2′-O-methyl thông qua quá trình tổng hợp pha rắn.

6. Sửa đổi CRISPR‑Cas Guide RNA (gRNA)

Các sửa đổi 2′-O-methyl được đặt ở các vị trí cụ thể trong gRNA CRISPR‑Cas có thể tăng cường tính ổn định, giảm khả năng sinh miễn dịch và cải thiện hiệu quả chỉnh sửa trong tế bào và in vivo. Phosphoramidite 2′-O-Methyl-rA(N-Bz) cho phép đưa dư lượng 2′-O-methyladenosine vào vị trí cụ thể vào các gRNA được tổng hợp hóa học.

7. Nghiên cứu RNA phân nhánh phốt phát

Các nhà nghiên cứu đang nghiên cứu các cấu trúc RNA đặc biệt, chẳng hạn như RNA phân nhánh phốt phát, sử dụng Phosphoramidite 2′-O-Methyl-rA(N-Bz) để điều chế các oligonucleotide mẫu chứa một nhóm 2′-OH tự do duy nhất nhằm nghiên cứu tính ổn định thủy phân của các liên kết phosphotriester phân nhánh trong điều kiện sinh lý.

8. Nghiên cứu độ ổn định nhiệt của Oligonucleotide biến tính

Phosphoramidite 2′-O-Methyl-rA(N-Bz) được sử dụng trong các nghiên cứu có hệ thống về độ ổn định nhiệt (Tm) của các song công oligonucleotide biến đổi, bao gồm đặc tính tác động vị trí của các biến đổi 2′-O-methyl đối với nhiệt độ nóng chảy song công và nhiệt động lực học lai.

9. Tổng hợp Oligonucleotide pha rắn

Phát triển quy trình Các nhà hóa học quy trình và chuyên gia tổng hợp oligonucleotide sử dụng Phosphoramidite 2′-O-Methyl-rA(N-Bz) để tối ưu hóa các điều kiện ghép, quy trình khử bảo vệ và phương pháp tinh chế để sản xuất quy mô lớn các liệu pháp điều trị bằng axit nucleic biến đổi 2′-O-methyl. Cosperpharm cung cấp dữ liệu phân tích theo lô cụ thể để hỗ trợ các hoạt động xác thực quy trình và mở rộng quy mô.

10. Phát triển phương pháp phân tích để kiểm soát chất lượng oligonucleotide

2′-O-Methyl-rA(N-Bz) Phosphoramidite được sử dụng làm chất chuẩn đối chiếu trong quá trình phát triển các phương pháp HPLC và LC-MS để định lượng hàm lượng nucleoside biến đổi trong các dược chất và sản phẩm thuốc oligonucleotide, cũng như để xác định các tạp chất liên quan đến tổng hợp (ví dụ: loại bỏ DMT không hoàn toàn, các sản phẩm khử purin, các sản phẩm phụ oxy hóa photphit).

Liên hệ với chúng tôi

Bạn cần Phosphoramidite 2′-O-Methyl-rA(N-Bz) đáng tin cậy, có độ tinh khiết cao cho dự án tổng hợp oligonucleotide tiếp theo của bạn? Đội ngũ của Cosperpharm sẵn sàng hỗ trợ về thông số kỹ thuật của sản phẩm, nhu cầu về tài liệu và giải pháp chuỗi cung ứng phù hợp với ứng dụng của bạn.