Tổng quan
Icatibant axetat là một phương pháp điều trị đặc hiệu cho bệnh u mạch máu (HAE) do Shire phát triển và được FDA chấp thuận vào ngày 25 tháng 8 năm 2011, để kiểm soát các đợt cấp tính của bệnh phù mạch di truyền ở người lớn từ 18 tuổi trở lên. Đây cũng là loại thuốc thứ ba được FDA phê chuẩn để điều trị các cơn HAE. Icatibant acetate có cấu trúc tương tự như d-decapeptide giống bradykinin nhưng chứa năm axit amin không có nguồn gốc từ protein. Nó hoạt động như một chất đối kháng cạnh tranh mạnh mẽ, có chọn lọc của thụ thể bradykinin loại 2 (B2), làm giảm sưng, viêm và đau cục bộ liên quan đến các đợt HAE bằng cách ức chế tác dụng của bradykinin. HAE chỉ đại diện cho một trong số nhiều chỉ định tiềm năng mà icatibant có thể được chỉ định; các ứng dụng tiềm năng khác bao gồm hen suyễn, xơ gan và các loại phù mạch khác. Do đó, icatibant acetate thể hiện giá trị điều trị đáng kể và triển vọng thị trường rộng lớn.
Công thức cấu trúc hóa học củaIcatibant axetat
Ethiết yếuIthông tin
Tên tiếng Trung:醋酸艾替班特
Tên tiếng Anh: Icatibant axetat
Mã công ty：GT-F005
CAS：138614-30-9；130308-48-4
Ssố eri：H-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH
Mcông thức phân tử：C59H89N19O13S
Mtrọng lượng phân tử：1304.52
Icatibant axetat Phổ MS
Tuyến đường tổng hợp
1: Chuẩn bị nhựa Fmoc-Arg(Pbf)-CTC
Thêm 11,1 g nhựa 2-chlorotrifenylmethyliclorua với tốc độ thay thế 0,9 mmol/g vào cột phản ứng pha rắn, sau đó thêm nhựa trương nở DMF trong 30 phút. Thêm 3,50μL DIPEA vào 12,98 g Fmoc-Arg(Pbf)-OH và kích hoạt trong 5 phút; sau đó thêm nhựa trương nở DMF và để hỗn hợp đạt trạng thái cân bằng sau 10 phút. Thêm 3,50 nữaμL DIPEA, phản ứng ở nhiệt độ phòng trong 45 phút và cuối cùng bịt kín bằng metanol trong 20 phút. Làm bay hơi hỗn hợp phản ứng, rửa ba lần bằng DMF, ba lần bằng DCM, sau đó co lại ba lần bằng metanol trong thời gian lần lượt là 3 phút, 5 phút và 8 phút, thu được nhựa Fmoc-Arg(Pbf)-CTC với tỷ lệ thay thế đo được là 0,5 mmol/g.
2：Khớp nối của Fmoc-Oic-Ồ
Cân 10 mmol nhựa Fmoc-Arg (Pbf)-CTC và thêm nó vào thiết bị phản ứng pha rắn, trương nở trong DMF trong 0,5 giờ, sau đó loại bỏ lớp bảo vệ Fmoc hai lần bằng dung dịch DBLK 20% trong 10 phút và 5 phút tương ứng; sau khi rửa sạch, liên hợp với Fmoc-Oic-OH. Hòa tan 11,73 g Fmoc-Oic-OH, 4,9 g HOBt và 6,1 mL DIC trong DCM (có thể thêm một lượng nhỏ DMF để hòa tan), hoạt hóa hỗn hợp trong bể nước đá trong 7 phút, sau đó chuyển nó vào lò phản ứng pha rắn và phản ứng ở nhiệt độ phòng trong 1–2 giờ. Điểm cuối phản ứng được xác định bằng phương pháp indantrone. Sau khi hoàn thành, hút hỗn hợp phản ứng, rửa bằng DMF, loại bỏ lớp bảo vệ Fmoc hai lần bằng dung dịch DBLK 20% trong 10 phút và 5 phút tương ứng, rửa lại và chuẩn bị ghép với axit amin tiếp theo.
3：Khớp nối của Fmoc-D-Cit-Ồ
Hòa tan 11,91 g Fmoc-D-Cit-OH, 5,00 g HOAt và 11,4 g HATU trong DCM (thêm một lượng nhỏ DMF để hòa tan). Thêm 3,87 g DIPEA vào bồn nước đá và kích hoạt trong 7 phút; sau đó chuyển hỗn hợp sang thiết bị phản ứng pha rắn và phản ứng ở nhiệt độ phòng trong 1–2 giờ. Việc hoàn thành phản ứng được xác định bằng phương pháp indiol. Sau phản ứng, loại bỏ hỗn hợp phản ứng, rửa bằng DMF và loại bỏ lớp bảo vệ Fmoc bằng dung dịch DBLK 20%. Sau khi rửa, chuẩn bị ghép với axit amin tiếp theo.
4：Khớp nối của Fmoc-Ser(tBu)-Ồ
Hòa tan 11,49 g Fmoc-Ser(tBu)-OH, 5,00 g HOAt và 6,1 mL DIC trong DCM (với một lượng nhỏ DMF được thêm vào để hòa tan). Sau khi kích hoạt trong bể nước đá trong 7 phút, chuyển hỗn hợp sang thiết bị phản ứng pha rắn và phản ứng ở nhiệt độ phòng trong 1–2 giờ; Việc hoàn thành phản ứng được xác định bằng phương pháp indiol. Sau khi hoàn thành, loại bỏ hỗn hợp phản ứng, rửa bằng DMF, sau đó loại bỏ chất bảo vệ Fmoc bằng dung dịch DBLK 20%, sau đó rửa sạch trước khi tiến hành ghép với axit amin tiếp theo.
5：Khớp nối của Fmoc-Thị-Ồ
Hòa tan 11,79 g Fmoc-Thi-OH, 5,00 g HOBt và 11,37 g HBTU trong DCM (thêm một lượng nhỏ DMF để hòa tan). Thêm 3,87 g DIPEA vào bồn nước đá và kích hoạt trong 7 phút; sau đó chuyển hỗn hợp sang thiết bị phản ứng pha rắn và cho phép phản ứng ở nhiệt độ phòng trong 1–2 giờ. Việc hoàn thành phản ứng được xác định bằng phương pháp indiol. Sau phản ứng, loại bỏ hỗn hợp phản ứng, rửa bằng DMF và loại bỏ lớp bảo vệ Fmoc bằng dung dịch DBLK 20%. Sau khi rửa, chuẩn bị ghép với axit amin tiếp theo.
6：Khớp nối của Fmoc-Gly-Ồ
Hòa tan 8,91 g Fmoc-Gly-OH, 5,00 g HOBt và 9,63 g TBTU trong DCM (có thêm một lượng nhỏ DMF để hòa tan). Thêm 3,63 g TMP vào bồn nước đá và kích hoạt trong 7 phút; sau đó chuyển hỗn hợp sang thiết bị phản ứng pha rắn và cho phép phản ứng ở nhiệt độ phòng trong 1–2 giờ. Sự kết thúc phản ứng được xác định bằng phương pháp indanone. Sau phản ứng, loại bỏ hỗn hợp phản ứng, rửa bằng DMF và loại bỏ lớp bảo vệ Fmoc bằng dung dịch DBLK 20%. Sau khi rửa, chuẩn bị ghép với axit amin tiếp theo.
7：Khớp nối của Fmoc-Hyp(tBu)-Ồ
Hòa tan 12,27 g Fmoc-Hyp(tBu)–Ồ, 5,00 g HOAt và 9,66 g TATU trong DCM (với một lượng nhỏ DMF được thêm vào để hòa tan). Thêm 3,63 g TMP vào bồn nước đá và kích hoạt trong 7 phút; sau đó chuyển hỗn hợp sang thiết bị phản ứng pha rắn và phản ứng ở nhiệt độ phòng trong 1–2 giờ. Điểm cuối phản ứng được xác định bằng phương pháp indiol. Sau khi hoàn thành, loại bỏ hỗn hợp phản ứng, rửa bằng DMF và loại bỏ lớp bảo vệ Fmoc bằng dung dịch DBLK 20%. Sau khi rửa, chuẩn bị ghép với axit amin tiếp theo.
8：Khớp nối của Fmoc-chuyên nghiệp-Ồ
Hòa tan 10,11 g Fmoc-Pro-OH, 5,00 g HOAt và 11,4 g HATU trong DCM (thêm một lượng nhỏ DMF để hòa tan). Thêm 3,87 g DIPEA vào bồn nước đá và kích hoạt trong 7 phút; sau đó chuyển hỗn hợp sang thiết bị phản ứng pha rắn và phản ứng ở nhiệt độ phòng trong 1–2 giờ. Điểm cuối phản ứng được xác định bằng phương pháp indiol. Sau khi hoàn thành, loại bỏ hỗn hợp phản ứng, rửa bằng DMF và loại bỏ lớp bảo vệ Fmoc bằng 20% DBLK. Sau khi rửa sạch, chuẩn bị ghép với axit amin tiếp theo.
9：Khớp nối của Fmoc-Arg(Pbf)-Ồ
Hòa tan 19,44 g Fmoc-Arg(Pbf)-OH, 5,00 g HOAt và 11,4 g HATU trong DCM (có thêm một lượng nhỏ DMF để hòa tan). Thêm 3,87 g DIPEA vào bồn nước đá và kích hoạt trong 7 phút; sau đó chuyển hỗn hợp sang thiết bị phản ứng pha rắn và phản ứng ở nhiệt độ phòng trong 1–2 giờ. Việc hoàn thành phản ứng được xác định bằng phương pháp indiol. Sau phản ứng, loại bỏ hỗn hợp phản ứng, rửa bằng DMF và loại bỏ lớp bảo vệ Fmoc bằng dung dịch DBLK 20%. Sau khi rửa, chuẩn bị ghép với axit amin tiếp theo.
10：Khớp nối của Fmoc-D-Arg(Pbf)-Ồ
Hòa tan 19,44 g Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH, 5,00 g HOAt và 11,4 g HATU trong DCM (có thêm một lượng nhỏ DMF để hòa tan). Thêm 3,87 g DIPEA vào bồn nước đá và kích hoạt trong 7 phút; sau đó chuyển hỗn hợp sang thiết bị phản ứng pha rắn và phản ứng ở nhiệt độ phòng trong 1–2 giờ. Điểm cuối phản ứng được xác định bằng phương pháp indiolone. Sau khi hoàn thành, loại bỏ hỗn hợp phản ứng, rửa bằng DMF, sau đó sử dụng DBLK 20% để loại bỏ lớp bảo vệ Fmoc. Rửa ba lần bằng DMF, ba lần bằng DCM và ba lần bằng metanol để co lại (lần lượt trong 3 phút, 5 phút và 8 phút), sau đó sấy khô chân không để thu được nhựa axetat peptide etibant.
Sắc ký đồ HPLC của Icatibant axetat
11：Nhiệt phân nhựa Icatibant axetat
Chuẩn bị 200 mL thuốc thử ly giải chứa 190 mL axit trifluoroacetic, 6 mL triisopropylsilane và 4 mL nước rồi làm lạnh trước trong tủ lạnh trong 30 phút. Thêm 20,0 g nhựa axetat peptide etibant vào bình cầu đáy tròn 500 mL, sau đó thêm 200 mL thuốc thử ly giải đã chuẩn bị vào nhựa trong khi khuấy trong bể nước đá và dưới dòng khí nitơ. Sau 30 phút phản ứng, lấy bể nước đá ra và tiếp tục phản ứng ở nhiệt độ phòng trong 2 giờ. Lọc nhựa và thu lấy dịch lọc. Rửa nhựa bằng một lượng nhỏ axit trifloaxetic, lọc và gộp dịch lọc. Thêm dần dần dịch lọc vào 20 L ete lạnh như đá; tạo thành kết tủa màu trắng. Ly tâm ở tốc độ 3000 vòng/phút để thu kết tủa, rửa năm lần bằng ete lạnh bằng đá và sấy khô dưới áp suất giảm thu được 10,3 g peptide thô có độ tinh khiết HPLC>90%.
